Asam propionat (PPA), sada agen antijamur ras aditif pangan si biasa, enggo teridah banci erbahan perkembangen saraf si la normal i bas tikus si isertai disfungsi pencernaan, si banci saja erkiteken disbiosis usus. Sada hubungen antara paparen PPA diet ras disbiosis mikrobiota usus enggo iusulken, tapi lenga iselidiki secara langsung. I jenda, iselidiki kami perubahen si lit hubungenna ras PPA i bas komposisi mikrobiota usus si banci erbahanca terjadi disbiosis. Mikrobioma usus tikus si ibereken pangan si la irawat (n=9) ras pangan si ipekaya PPA (n=13) iurutken alu make uruten metagenomik jangka panjang guna menilai perbedan komposisi mikroba ras jalur metabolisme bakteri. PPA diet ihubungken ras peningkatan kelimpahen taksa si signifikan, termasuk piga-piga spesies Bacteroides, Prevotella, ras Ruminococcus, anggotana sebelumna enggo terlibat ibas produksi PPA. Mikrobioma tikus si terpapar PPA pe lebih mbue jalurna si berhubungen ras metabolisme lipid ras biosintesis hormon steroid. Hasil kami ncidahken maka PPA banci ngubah mikrobiota usus ras jalur metabolisme si lit hubungenna. Perubahen si iperdiateken enda ncidahken maka pengawet si iklasifikasiken aman guna ikonsumsi banci mpengaruhi komposisi mikrobiota usus ras, i bas gilirenna, kesehaten manusia. I bas si e, P, G ntah pe S ipilih tergantung ku tingkat klasifikasi si sangana ianalisa. Guna meminimalken dampak klasifikasi positif palsu, ibahan ambang batas kelimpahen relatif minimal 1e-4 (1/10.000 bacaan). Sope ibahan analisis statistik, kelimpahen relatif si ilaporken Bracken (pecahen_jumlah_bacaan) iubah alu make transformasi rasio log (CLR) si berpusat (Aitchison, 1982). Metode CLR ipilih guna transformasi data erkiteken invarian skala ras cukup guna himpunan data si la jarang (Gloor dkk., 2017). Transformasi CLR enda make logaritma alami. Data hitungen si ilaporken Bracken i normalisasi alu make ekspresi log relatif (RLE) (Anders ras Huber, 2010). Angka ihasilken alu make kombinasi matplotlib v 3.7.1, seaborn v 3.7.2 ras logaritma beruruten (Gloor dkk., 2017). 0,12,2 ras stantanotasi v. 0,5,0 (Pemburu, 2007; Waskom, 2021; Charlier ras teman-temanna, 2022). Rasio Basil/Bakteroidetes iperhitungken guna tiap sampel alu make jumlah bakteri si enggo normalisasi. Nilai-nilai si ilaporken ibas tabel-tabel e ibulatenken ku 4 desimal. Indeks keragamen Simpson iperhitungken alu make skrip alpha_diversity.py si enggo isediaken i bas paket KrakenTools v. Laporan Bracken isediaken ibas naskah ras indeks Simpson “Si” isediaken guna parameter -an. Perbedaan si signifikan ibas kelimpahen i definisiken sebagai perbedaan CLR rata-rata ≥ 1 ntah pe ≤ -1. Perbedaan CLR rata-rata ±1 nuduhken peningkatan 2,7 kali lipat ibas kelimpahen sada jenis sampel. Tanda (+/-) ncidahken maka takson e lebih melala i bas sampel PPA ras sampel kontrol masing-masing. Signifikansi itentuken alu make uji U Mann-Whitney (Virtanen dkk., 2020). 0,14 (Benjamini ras Hochberg, 1995; Seabold ras Perktold, 2010) ipake, janah prosedur Benjamini-Hochberg iterapken guna memperbaiki guna pengujin si erbage-bage. Nilai p si isesuaiken ≤ 0,05 ipake jadi ambang batas guna nentuken signifikansi statistik.
Mikrobioma manusia rusur ikataken “organ terakhir i bas kula” ras berperan penting i bas kesehaten manusia (Baquero ras Nombela, 2012). Secara khusus, mikrobioma usus iakui erkiteken pengaruh ras peranna i bas kerina sistem i bas melala fungsi si esensial. Bakteri komensal melala i bas usus, menempati piga-piga relung ekologis, memanfaatken nutrisi, ras bersaing ras potensi patogen (Jandhyala dkk., 2015). Erbage-bage komponen bakteri mikrobiota usus mampu menghasilken nutrisi si penting bagi vitamin ras mendorong pencernaan (Rowland dkk., 2018). Metabolit bakteri pe enggo teridah banci mpengaruhi perkembangen jaringan ras meningkatken jalur metabolisme ras kekebalen (Heijtz dkk., 2011; Yu dkk., 2022). Komposisi mikrobioma usus manusia luar biasa beragam ras tergantung ku faktor genetik ras lingkungen bagi pola makan, jenis kelamin, obat-obatan, ras status kesehaten (Kumbhare dkk., 2019).
Diet nande eme komponen kritis ibas perkembangen janin ras neonatal ras sumber senyawa si ianggap banci mpengaruhi perkembangen (Bazer dkk., 2004; Innis, 2014). Salah sada senyawa si menarik eme asam propionat (PPA), produk sampingen asam lemak berantai pendek si idatken arah fermentasi bakteri ras aditif pangan (den Besten dkk., 2013). PPA lit sifat antibakteri ras antijamur emaka ipake sebage pengawet pangan ras ibas aplikasi industri guna menghambat pertumbuhen jamur ras bakteri (Wemmenhove dkk., 2016). PPA lit efekna si berbeda ibas jaringan si berbeda. I bas hati, PPA lit efek anti-inflamasi alu mpengaruhi ekspresi sitokin i bas makrofag (Kawasoe dkk., 2022). Efek pengatur enda pe enggo iperdiatekenna i bas sel-sel kekebalen tubuh si deban, si erbahanca terjadi downregulasi peradangan (Haase dkk., 2021). Tapi, efek si sebalikna enggo iperdiateken i bas otak. Penelitian sebelumna enggo ncidahken maka paparen PPA menginduksi perilaku mirip autis ibas tikus (El-Ansary dkk., 2012). Penelitin si deban enggo ncidahken maka PPA banci menginduksi gliosis ras mengaktifken jalur pro-inflamasi i bas otak (Abdelli dkk., 2019). Erkiteken PPA eme asam si lemah, maka banci meresap arah epitel usus ku bas aliren dareh ras alu bage lintas penghalang pembatasen termasuk penghalang darah-otak bagepe plasenta (Stinson dkk., 2019), si menyoroti pentingna PPA sebage metabolit pengatur si ihasilken bakteri. Aminna pe peran potensial PPA sebage faktor resiko autis gundari sangana i selidiki, efekna man individu si autis banci saja lebih asangken menginduksi diferensiasi saraf.
Gejala pencernaan bagi diare ras sembelit enggo biasa terjadi ibas pasien si lit gangguan perkembangan saraf (Cao dkk., 2021). Penelitian sebelumna enggo ncidahken maka mikrobioma pasien gangguan spektrum autis (ASD) berbeda ras individu si sehat, si ncidahken litna disbiosis mikrobiota usus (Finegold dkk., 2010). Bagepe karakteristik mikrobioma pasien si lit pinakit radang usus, obesitas, pinakit Alzheimer, rsd pe berbeda ras individu si sehat (Turnbaugh dkk., 2009; Vogt dkk., 2017; Henke dkk., 2019). Tapi seh asa gundari, lenga lit hubungen kausal si enggo itetapken antara mikrobioma usus ras pinakit ntah pe gejala saraf (Yap dkk., 2021), aminna pe piga-piga spesies bakteri iakap berperan i bas piga-piga keadaan pinakit enda. Umpamana, Akkermansia, Bakteroides, Clostridium, Lactobacillus, Desulfovibrio ras genera si debanna lebih melala i bas mikrobiota pasien autis (Tomova dkk., 2015; Golubeva dkk., 2017; Cristiano dkk., 2018; Zurita2 dkk. Si khususna, spesies anggota piga-piga genera enda itandai lit gen si lit hubungenna ras produksi PPA (Reichardt dkk., 2014; Yun ras Lee, 2016; Zhang dkk., 2019; Baur ras Dürre, 2023). Adi siperdiateken sifat antimikroba PPA, nambahi kelimpahenna banci saja bermanfaat man pertumbuhen bakteri penghasil PPA (Jacobson dkk., 2018). Alu bage, lingkungen si bayak PFA banci erbahan perubahen mikrobiota usus, termasuk patogen pencernaan, si banci jadi faktor potensial si erbahanca lit gejala pencernaan.
Sada penungkunen sentral ibas penelitian mikrobioma eme apakah perbedan komposisi mikroba eme penyebab ntah pe gejala pinakit si mendasari. Langkah si pemena guna njelasken hubungen si kompleks antara diet, mikrobioma usus, ras pinakit saraf eme menilai efek diet nandangi komposisi mikroba. Guna si e, ipake kami uruten metagenomik si enggo ndekah ibaca guna mbandingken mikrobioma usus kesusuren tikus si ibereken pangan si bayak PPA ntah pe si kurang PPA. Kesusurenna ibereken pangan si seri ras nandena. Ihipotesisken kami maka diet si bayak PPA banci erbahan perubahen komposisi mikroba usus ras jalur fungsional mikroba, khususna si berhubungen ras metabolisme PPA ras/ntah pe produksi PPA.
Penelitin enda make tikus transgenik FVB/N-Tg(GFAP-GFP)14Mes/J (Jackson Laboratories) si mengekspresiken protein fluoresen hijau (GFP) si berlebihen i teruh kendali promotor GFAP spesifik glia ngikutken pedoman Komite Perawatan ras Penggunaan Hewan Institusional Universitas Florida Tengah ( PROTO 20200002). Kenca enggo isap, tikus itamaken secara individual ibas kandang alu 1-5 tikus ibas tiap jenis kelamin per kandang. Tikus ibereken pangan ad libitum alu diet kontrol si enggo imurniken (diet standar terbuka si imodifikasi, 16 kcal% lemak) ntah pe diet si itambahi natrium propionat (diet standar terbuka si imodifikasi, 16 kcal% lemak, si mengandung 5.000 ppm natrium propionat). Jumlah natrium propionat si ipake setara ras 5.000 mg PFA/kg berat pangan total. Enda me konsentrasi PPA si meganjangna si enggo isetujui guna ipake sebage pengawet pangan. Guna persiapen penelitian enda, tikus induk ibereken duana diet e selama 4 minggu ope denga erjabu ras iterusken sepanjang kehamilan dam. Tikus keturunen [22 tikus, 9 kontrol (6 dilaki, 3 diberu) ras 13 PPA (4 dilaki, 9 diberu)] isapken kenca si e ilanjutken alu diet si seri ras bendungan e sedekah 5 bulan. Tikus keturunen ikorbanken ibas umur 5 bulan ras isi feses ususna ikumpulken ras awalna isimpan ibas tabung mikrosentrifuga 1,5 ml ibas suhu -20°C kenca si e ipindahken ku freezer -80°C seh DNA inang enggo keri ras asam nukleat mikroba i ekstraksi.
DNA inang ibuat rikutken protokol si enggo imodifikasi (Charalampous dkk., 2019). Singkatna, isi kotoren ipindahken ku 500 μl InhibitEX (Qiagen, Cat#/ID: 19593) ras isimpan beku. Olah maksimal 1-2 pelet feses per ekstraksi. Isi feses e kenca si e i homogenisasi secara mekanis alu make alu plastik si lit i bas tabung e guna membentuk bubur. Sentrifugasi sampel ibas 10.000 RCF selama 5 min ntah pe seh sampel enggo pelet, kenca si e aspirasi supernatan ras isuspensi mulihi pelet ibas 250 μl 1× PBS. Tambahken 250 μl larutan saponin 4,4% (TCI, nomor produk S0019) ku sampel jadi deterjen guna ngelepasken membran sel eukariotik. Sampel e icampur alu lembut seh alus ras iinkubasi ibas suhu kamar selama 10 min. Selanjutna, guna mengganggu sel eukariotik, itambahken 350 μl lau si la lit nukleasena ku sampel, iinkubasi 30 s, kenca si e itambahken 12 μl NaCl 5 M. Sampel-sampel e kenca bage i sentrifugasi ibas 6000 RCF selama 5 min. Aspirasi supernatan ras isuspensi mulihi pelet ibas 100 μl 1X PBS. Guna mbuang DNA inang, itambahken 100 μl penyangga HL-SAN (12,8568 g NaCl, 4 ml MgCl2 1M, 36 ml lau bebas nuklease) ras 10 μl enzim HL-SAN (ArticZymes P/N 70910-202). Sampel icampur alu mehuli alu pipet ras iinkubasi ibas suhu 37 °C selama 30 min ibas 800 rpm ibas EppendorfTM ThermoMixer C. Kenca inkubasi, isentrifugasi ibas suhu 6000 RCF selama 3 min ras icuci dua kali alu 800 μ0μl ras P011. Dungna, isuspensi mulihi pelet e i bas 100 μl 1X PBS.
Total DNA bakteri iisolasi alu make Kit Pemurnian DNA Genom Monarch Biolabs Inggris Baru (Biolabs Inggris Baru, Ipswich, MA, Cat# T3010L). Prosedur operasi standar si isediaken ras kit e iubah sitik. Inkubasi ras pertahanken lau si la lit nukleasena i bas suhu 60°C ope denga ioperasiken guna eluasi akhir. Tambahken 10 μl Proteinase K ras 3 μl RNase A ku tep-tep sampel. Jenari tambahi 100 μl Penyangga Lisis Sel ras icampur alu lembut. Sampel kenca e i inkubasi ibas ThermoMixer C EppendorfTM ibas suhu 56°C ras 1400 rpm sekurang-kurangna 1 jam ras seh ku 3 jam. Sampel si enggo iinkubasi isentrifugasi ibas 12.000 RCF selama 3 menit ras supernatan ibas tiap sampel ipindahken ku tabung mikrosentrifuga 1,5 mL si terpisah si iisi 400 μL larutan pengikat. Tabung-tabung e kenca e i putar pulsa selama 5-10 detik alu interval 1 detik. Pindahken kerina isi cairen i bas tep-tep sampel (kira-kira 600–700 μL) ku bas kartrid saringan si itamaken i bas tabung pengumpulen aliren. Tabung-tabung e isentrifugasi ibas 1.000 RCF selama 3 menit gelah banci awal mengikat DNA kenca si e isentrifugasi ibas 12.000 RCF selama 1 menit guna mbuang cairen si tading. Kolom sampel e ipindahken ku tabung pengumpulen si mbaru kenca si e icuci dua kali. Guna pencucian si pemena, tambahi 500 μL penyangga cuci ku tiap tabung. Balikken tabung e 3-5 kali kenca si e sentrifugasi alu suhu 12.000 RCF selama 1 menit. Buanglah cairan i bas tabung pengumpulen nari janah tamaken mulihi kartrid filter ku bas tabung pengumpulen si seri. Guna pencucian si peduaken, tambahi 500 μL penyangga cucian ku saringan alu la terbalik. Sampel i sentrifugasi ibas 12.000 RCF selama 1 menit. Pindahken filter ku tabung LoBind® 1,5 mL ras tambahken 100 μL lau si enggo ipemanas lebe si la lit nukleasena. Filter iinkubasi ibas suhu kamar selama 1 menit kenca si e isentrifugasi ibas 12.000 RCF selama 1 menit. DNA si enggo ielusi isimpan i bas suhu -80°C.
Konsentrasi DNA iukur alu make Fluorometer QubitTM 4.0. DNA ibahan alu make Kit Sensitivitas Tinggi dsDNA QubitTM 1X (Cat. No. Q33231) sue ras petunjuk pabrik. Persebaran gedang pecahen DNA iukur alu make TapeStation AglientTM 4150 ntah pe 4200. DNA ibahan alu make Reagen DNA Genom AgilentTM (Kat. No. 5067-5366) ras Pita Layar DNA Genom (Kat. No. 5067-5365). Persiapen perpustakaan ilakoken alu make Kit Pengkodean Batang PCR Cepat Oxford Nanopore TechnologiesTM (ONT) (SQK-RPB004) sue ras petunjuk pabrik. DNA iurutken alu make uruten ONT GridIONTM Mk1 alu sel aliren Min106D (R 9.4.1). Pengaturan uruten eme: panggilen dasar akurasi tinggi, nilai q minimal 9, pengaturen kode batang, ras trim kode batang. Sampel iurutken selama 72 jam, kenca si e data panggilen dasar ibereken guna iproses ras ianalisis lebih lanjut.
Pengolahen bioinformatika ilakoken alu make cara si enggo ituriken sebelumna (Greenman dkk., 2024). Berkas FASTQ si idatken arah uruten ibagi jadi direktori guna tiap sampel. Sope analisis bioinformatika, data iproses alu make pipeline si tersena i teruh enda: pemena, file FASTQ sampel igabungken jadi sada file FASTQ. Jenari, bacaan si lebih gendek asangken 1000 bp isaring alu make Filtlong v. 1.41.3 alu parameter-parameter si tersena i teruh enda: –fastq –plot dot –N50 -o .
Guna klasifikasi taksonomi, kontig si ibaca ras si irakit iklasifikasiken alu make Kraken2 v. Menghasilken laporen ras file output guna bacaan ras majelis, masing-masing. Gunaken pilihen –use-names guna nganalisis bacaan ras perpulungen. Opsi –gzip-kompresi ras –ipasangken itentuken guna segmen si ibaca. Kelimpahen taksa si relatif i bas metagenom iperkiraken alu make Bracken v. Pertama-tama ibahan kami sada basis data kmer si isina 1000 basis alu make bracken-build alu parameter-parameter si tersena i teruh enda: -d .
Anotasi gen ras estimasi kelimpahen relatif ilakoken alu make versi protokol si imodifikasi si ituriken Maranga dkk. (Maranga ras teman-temanna, 2023). Si pemena, kontig si gendekna asangken 500 bp ibuat i bas kerina majelis alu make SeqKit v. Majelis si ipilih e kenca si e igabungken jadi sada pan-metagenom. Bingkai bacaan terbuka (ORF) iidentifikasi alu make Prodigal v. 1.0.1 (versi paralel Prodigal v. 2.6.3) alu parameter-parameter si tersena i teruh enda: -d .
Gen tangtangna ikelompokken rikutken pengidentifikasi ortolog (KO) Ensiklopedia Gen ras Genom Kyoto (KEGG) si itugasken eggNOG guna membandingken kelimpahen jalur gen. Gen si la lit knockoutna ntah pe gen si lit piga-piga knockoutna itangtangi ope denga ianalisis. Rata-rata kelimpahen tiap KO per sampel kenca si e iperhitungken ras ilakoken analisis statistik. Gen metabolisme PPA i definisiken sebagai gen kai pe si itugasken baris ko00640 ibas kolom KEGG_Pathway, si nuduhken peran ibas metabolisme propionat menurut KEGG. Gen si iidentifikasi lit hubungenna ras produksi PPA isuratken i bas Tabel Tambahan 1 (Reichardt dkk., 2014; Yang dkk., 2017). Tes permutasi ilakoken guna ngidentifikasi metabolisme ras gen produksi PPA si secara signifikan lebih melala i bas tep-tep jenis sampel. Seribu permutasi ilakoken man tep-tep gen si ianalisis. Nilai p 0,05 ipake jadi cutoff guna nentuken signifikansi statistik. Anotasi fungsional ibereken man gen-gen individu i bas sada kelompok erpalasken anotasi gen perwakilen i bas kelompok e. Taksa si lit hubungenna ras metabolisme PPA ras/ntah pe produksi PPA banci iidentifikasi alu mencocokken ID contig i bas file output Kraken2 ras ID contig si seri si ipertahanken sanga anotasi fungsional alu make eggNOG. Pengujian signifikansi ilakoken alu make tes Mann-Whitney U si enggo ituriken ndai. Koreksi guna pengujin si erbage-bage ilakoken alu make prosedur Benjamini-Hochberg. Nilai p ≤ 0,05 ipake jadi cutoff guna nentuken signifikansi statistik.
Keragamen mikrobioma usus tikus i evaluasi alu make indeks keragamen Simpson. La lit perbedan si signifikan si iperhatiken antara sampel kontrol ras PPA ibas segi keragamen genus ras spesies (nilai p guna genus : 0,18, nilai p guna spesies : 0,16) (Gambar 1). Komposisi mikroba kenca si e iperbandingen alu make analisis komponen utama (PCA). Gambar 2 ncidahken pengelompoken sampel menurut filumna, si ncidahken maka lit perbedan komposisi spesies mikrobioma antara sampel PPA ras kontrol. Pengelompoken enda kurang teridah ibas tingkat genus, si nuduhken maka PPA mpengaruhi bakteri tertentu (Gambar Tambahan 1).
Gambar 1. Keragamen alfa genera ras komposisi spesies mikrobioma usus tikus. Plot kotak si ncidahken indeks keragamen Simpson genera (A) ras spesies (B) i bas sampel PPA ras kontrol. Signifikansi itentuken alu make tes U Mann-Whitney, janah koreksi berganda ilakoken alu make prosedur Benjamini-Hochberg. ns, nilai p-na labo signifikan (p>0,05).
Hasil analisis komponen utama komposisi mikrobioma usus tikus ibas tingkat spesies. Plot analisis komponen utama ncidahken persebaran sampel i bas dua komponen utamana si pemena. Warna nuduhken jenis sampel: Tikus si terkena PPA warnana ungu ras tikus kontrol warnana kuning. Komponen utama 1 ras 2 igambarkan i bas sumbu x ras sumbu y, janah ikataken sebage rasio varians si ijelaskenna.
Alu make data hitungen si iubah RLE, penurunen rasio median Bacteroidetes/Basil si signifikan iperhatiken i bas tikus kontrol ras PPA (kontrol: 9,66, PPA: 3,02; nilai p = 0,0011). Perbedaan enda erkiteken kelimpahen Bacteroidetes si lebih tinggi i bas tikus PPA adi ibandingken ras kontrol, aminna pe perbedaan e la signifikan (CLR rata-rata kontrol: 5,51, CLR rata-rata PPA: 6,62; nilai p = 0,054), sedangken kelimpahen Bakteroidetes seri (CLR rata-rata kontrol7an,6PA:0.7). p-nilai = 0,18).
Analisis kelimpahen anggota taksonomi mikrobioma usus ncidahken maka 1 filum ras 77 spesies berbeda secara signifikan antara PPA ras sampel kontrol (Tabel Tambahan 2). Kelimpahen 59 spesies ibas sampel PPA secara signifikan lebih tinggi asangken sampel kontrol, sedangken kelimpahen 16 spesies ngenca ibas sampel kontrol lebih tinggi asangken sampel PPA (Gambar 3).
Gambar 3. Perbedaan kelimpahen taksa ibas mikrobioma usus tikus PPA ras kontrol. Plot gunung berapi ncidahken perbedan ibas kelimpahen genera (A) ntah pe spesies (B) antara PPA ras sampel kontrol. Titik-titik abu-abu ncidahken la lit perbedan si signifikan ibas kelimpahen taksa. Titik-titik si erwarna nuduhken perbedan si signifikan ibas kelimpahen (nilai p ≤ 0,05). taksa si pemena si lit perbedan kelimpahenna si mbelinna antara jenis sampel ituriken alu warna merah ras biru terang (sampel kontrol ras PPA), masing-masing. Titik-titik kuning ras ungu paling lambat 2,7 kali lebih melala i bas sampel kontrol ntah pe PPA asangken i bas kontrol. Titik-titik hitam mewakili taksa si lit kelimpahenna si berbeda secara signifikan, alu perbedan CLR rata-rata antara -1 ras 1. Nilai P ihitung alu make uji Mann-Whitney U ras ikoreksi guna pengujian berganda alu make prosedur Benjamini-Hochberg. Perbedan CLR berarti si tebal nuduhken perbedan si signifikan ibas kelimpahen.
Kenca enggo ianalisis komposisi mikroba usus, ilakoken kami anotasi fungsional mikrobioma. Kenca isaring gen si la mehuli kualitasna, lit 378.355 gen si unik si iidentifikasi i bas kerina sampel. Kelimpahen gen enda si enggo iubah ipake guna analisis komponen utama (PCA), janah hasilna ncidahken tingkat pengkelompoken jenis sampel si tinggi erpalasken profil fungsionalna (Gambar 4).
Gambar 4. Hasil PCA alu make profil fungsional mikrobioma usus tikus. Plot PCA ncidahken persebaran sampel i bas dua komponen utamana si pemena. Warna nuduhken jenis sampel: Tikus si terpapar PPA warnana ungu ras tikus kontrol warnana kuning. Komponen utama 1 ras 2 igambarkan i bas sumbu x ras sumbu y, janah ikataken sebage rasio varians si ijelaskenna.
Selanjutna iperiksa kami kerna kelimpahen knockout KEGG i bas jenis sampel si berbeda. Sejumlah 3648 knockout unik si iidentifikasi, i ja 196 secara signifikan lebih melala i bas sampel kontrol ras 106 lebih melala i bas sampel PPA (Gambar 5). Sejumlah 145 gen si terdeteksi ibas sampel kontrol ras 61 gen ibas sampel PPA, alu kelimpahen si berbeda secara signifikan. Jalur si berhubungen ras metabolisme lipid ras aminogula secara signifikan lebih ipekaya ibas sampel PPA (Tabel Tambahan 3). Jalur si berhubungen ras metabolisme nitrogen ras sistem relay belerang secara signifikan lebih ipekaya i bas sampel kontrol (Tabel Tambahan 3). Kelimpahen gen si berhubungen ras metabolisme gula amino/nukleotida (ko:K21279) ras metabolisme inositol fosfat (ko:K07291) secara signifikan lebih tinggi ibas sampel PPA (Gambar 5). Sampel kontrol secara signifikan lebih mbue gen si berhubungan ras metabolisme benzoat (ko:K22270), metabolisme nitrogen (ko:K00368), ras glikolisis/glukoneogenesis (ko:K00131) ( Gambar 5 ).
Perbedaan kelimpahen KO ibas mikrobioma usus tikus PPA ras kontrol. Plot gunung berapi nggambarken perbedan ibas kelimpahen kelompok fungsional (KO). Titik-titik abu-abu nuduhken KO si kelimpahenna la signifikan bedana antara jenis sampel (nilai p > 0,05). Titik-titik si erwarna nuduhken perbedan si signifikan ibas kelimpahen (nilai p ≤ 0,05). KO si lit perbedan kelimpahenna si mbelinna antara jenis sampel ituriken alu warna merah ras biru terang, si sesuai ras sampel kontrol ras PPA masing-masing. Titik-titik kuning ras ungu nuduhken KO si setidaknya 2,7 kali lipat lebih melala i bas sampel kontrol ras PPA masing-masing. Titik-titik hitam nuduhken KO si lit kelimpahenna si signifikan berbeda, alu perbedan CLR rata-rata antara -1 ras 1. Nilai P ihitung alu make uji Mann-Whitney U ras isesuaiken guna perbandingen si erbage-bage alu make prosedur Benjamini-Hochberg. NaN nuduhken maka KO enda termasuk sada jalur ibas KEGG. Nilai perbedan CLR si tebal berarti nuduhken perbedan si signifikan ibas kelimpahen. Guna informasi si terperinci kerna jalur-jalur si lit i bas KO si tercantum, nehen Tabel Tambahan 3.
I bas gen si ibereken cataten, 1601 gen lit kelimpahenna si berbeda secara signifikan antara jenis sampel (p ≤ 0,05), alu tep-tep gen sitikna 2,7 kali lipat lebih kelimpahenna. I bas gen enda, 4 gen lebih melala i bas sampel kontrol ras 1597 gen lebih melala i bas sampel PPA. Erkiteken PPA lit sifat antimikroba, iperiksa kami kelimpahen metabolisme ras gen produksi PPA antar jenis sampel. I bas 1332 gen si lit hubungenna ras metabolisme PPA, 27 gen secara signifikan lebih melala i bas sampel kontrol ras 12 gen lebih melala i bas sampel PPA. I bas 223 gen si lit hubungenna ras produksi PPA, 1 gen secara signifikan lebih melala i bas sampel PPA. Gambar 6A selanjutna ncidahken kelimpahen gen si terlibat ibas metabolisme PPA si lebih tinggi, alu kelimpahen si signifikan lebih tinggi ibas sampel kontrol ras ukuren efek si mbelin, sementara Gambar 6B menyoroti gen individu alu kelimpahen si signifikan lebih tinggi si iperhatiken ibas sampel PPA.
Gambar 6. Kelimpahen si berbeda gen si berhubungan ras PPA i bas mikrobioma usus tikus. Plot gunung berapi nggambarken perbedan i bas kelimpahen gen si lit hubungenna ras metabolisme PPA (A) ras produksi PPA (B). Titik-titik abu-abu nuduhken gen si kelimpahenna la signifikan bedana antara jenis sampel (nilai p > 0,05). Titik-titik si erwarna nuduhken perbedan si signifikan ibas kelimpahen (nilai p ≤ 0,05). gen si lit perbedan kelimpahenna si mbelinna icidahken alu warna merah ras biru terang (sampel kontrol ras PPA), masing-masing. Kelimpahen titik-titik kuning ras ungu setidaknya 2,7 kali lebih mbelin ibas sampel kontrol ras PPA asangken sampel kontrol. Titik-titik hitam mewakili gen si lit kelimpahenna si berbeda secara signifikan, alu perbedan CLR rata-rata antara -1 ras 1. Nilai P ihitung alu make tes Mann-Whitney U ras ikoreksi guna perbandingen si erbage-bage alu make prosedur Benjamini-Hochberg. Gen sesuai ras gen perwakilen ibas katalog gen si la berlebihen. Gelar gen terdiri ibas simbol KEGG si nuduhken sada gen KO. Tebal berarti perbedan CLR ncidahken kelimpahen si berbeda secara signifikan. Garis putus-putus (-) nuduhken maka la lit simbol gen e i bas database KEGG.
Taksa si lit genna si berhubungen ras metabolisme ras/ntah pe produksi PPA iidentifikasi alu mencocokken identitas taksonomi kontig ras ID kontig gen. Ibas tingkat genus, 130 genera idatken lit gen si berhubungan ras metabolisme PPA ras 61 genera idatken lit gen si berhubungen ras produksi PPA (Tabel Tambahan 4). Tapi, la lit sada pe genera si ncidahken perbedan si signifikan ibas kelimpahen (p > 0,05).
Ibas tingkat spesies, 144 spesies bakteri idatken lit gen si berhubungan ras metabolisme PPA ras 68 spesies bakteri idatken lit gen si berhubungen ras produksi PPA (Tabel Tambahan 5). I bas metabolismen PPA, lit waluh bakteri si ncidahken peningkatan kelimpahen si signifikan antara jenis sampel, janah kerina ncidahken perubahen si signifikan i bas efek (Tabel Tambahan 6). Kerina metabolismen PPA si iidentifikasi alu perbedan kelimpahen si signifikan lebih melala i bas sampel PPA. Klasifikasi tingkat spesies ncidahken perwakilen genera si la lit perbedan si signifikan antara jenis sampel, termasuk piga-piga spesies Bacteroides ras Ruminococcus, bage pe Duncania dubois, Myxobacterium enterica, Monococcus pektinolitikus, ras Alcaligenes polymorpha. I bas bakteri penghasil PPA, empat bakteri ncidahken perbedan si signifikan i bas kelimpahen antara jenis sampel. Spesies si lit perbedan si signifikan ibas kelimpahenna eme Bakterius novorossi, Duncania dubois, Miksobakterium enteritidis, ras Ruminococcus bovis.
I bas penelitian enda, iperiksa kami efek paparen PPA nandangi mikrobiota usus tikus. PPA banci menimbulken respon si berbeda ibas bakteri erkiteken ihasilken spesies tertentu, ipake sebage sumber pangan spesies sideban, ntah pe lit efek antimikroba. Emaka penambahanna ku lingkungen usus arah suplemen pangan banci saja lit efekna si berbeda tergantung ku toleransi, kerentanan, ras kemampuan memanfaatkenca sebage sumber nutrisi. Spesies bakteri si sensitif banci ihilangkan ras igantiken alu si lebih tahan nandangi PPA ntah pe ngasup memanfaatkenca jadi sumber pangan, si erbahanca terjadi perubahen komposisi mikrobiota usus. Hasil kami ncidahken perbedan si signifikan ibas komposisi mikroba tapi la lit pengaruhna nandangi keragamen mikroba secara keseluruhan. Efek si mbelinna iperhatiken i bas tingkat spesies, alu lebih 70 taksa si signifikan berbeda i bas kelimpahenna antara PPA ras sampel kontrol (Tabel Tambahan 2). Evaluasi lebih lanjut kerna komposisi sampel si terpapar PPA ncidahken heterogenitas spesies mikroba si lebih mbelin adi ibandingken ras sampel si la terpapar, si ncidahken maka PPA banci meningkatken karakteristik pertumbuhen bakteri ras membatasi populasi bakteri si banci bertahan nggeluh i bas lingkungen si bayak PPA. Alu bage, PPA banci secara selektif menginduksi perubahen labo erbahan gangguan si meluas nandangi keragamen mikrobiota usus.
Pengawet pangan bagi PPA enggo pernah teridah banci ngubah kelimpahen komponen mikrobioma usus alu la mpengaruhi keragamen secara keseluruhan (Nagpal dkk., 2021). I jenda, iperdiateken kami perbedan si paling mencolok antara spesies Bacteroidetes i bas filum Bacteroidetes (si mbarenda igelari Bacteroidetes), si secara signifikan ipebayak i bas tikus si terpapar PPA. Peningkatan kelimpahen spesies Bacteroides ihubungken ras peningkatan degradasi lendir, si banci meningkatken resiko infeksi ras mendorong peradangan (Cornick dkk., 2015; Desai dkk., 2016; Penzol dkk., 2019). Sada penelitian ncidahken maka tikus jantan neonatal si irawat alu Bacteroides fragilis ncidahken perilaku sosial si ngingetken gangguan spektrum autis (ASD) (Carmel dkk., 2023), ras penelitian si deban enggo ncidahken maka spesies Bacteroides banci ngubah aktivitas kekebalen ras mabai ku peradangan otoimun, alG. tahun 2019). Spesies si masuk ku bas genera Ruminococcus, Prevotella, ras Parabakteroides pe meningkat secara signifikan i bas tikus si terkena PPA (Coretti dkk., 2018). Spesies Ruminococcus tertentu lit hubungenna ras pinakit bagi pinakit Crohn arah produksi sitokin proinflamasi (Henke dkk., 2019), sedangken spesies Prevotella bagi Prevotella humani lit hubungenna ras pinakit metabolisme bagi hipertensi ras sensitivitas insulin.0. tahun 2017). Si terakhir, idat kami maka rasio Bakteroidetes (si mbarenda igelari Firmicutes) ras Bakteroidetes secara signifikan lebih rendah i bas tikus si terpapar PPA asangken i bas tikus kontrol erkiteken kelimpahen total spesies Bakteroidetes si lebih tinggi. Rasio enda enggo pernah teridah jadi indikator penting homeostasis usus, janah gangguan ibas rasio enda enggo ihubungken ras erbage keadaan pinakit (Turpin dkk., 2016; Takezawa dkk., 2021; An dkk., 2023), termasuk pinakit radang usus (Sto2.0ja). Secara kolektif, spesies filum Bacteroidetes teridah paling megegeh terpengaruh PPA diet si meningkat. Hal enda banci saja erkiteken toleransi si lebih tinggi nandangi PPA ntah pe kemampuan memanfaatken PPA sebage sumber energi, si enggo terbukti tuhu man setidaknya sada spesies, Hoylesella enocea (Hitch dkk., 2022). Atau, paparen PPA maternal banci meningkatken perkembangen janin alu erbahan usus keturunen tikus lebih rentan nandangi kolonisasi Bacteroidetes; tapi, desain studi kami la banci erbahan penilaian si bage.
Penilaian kandungan metagenomik ncidahken perbedan si signifikan ibas kelimpahen gen si berhubungan ras metabolisme ras produksi PPA, alu tikus si terpapar PPA ncidahken kelimpahen gen si lebih tinggi si bertanggung jawab ibas produksi PPA, sedangken tikus si la terpapar PPA ncidahken kelimpahen gen si lebih tinggi si bertanggung jawab nandangi metabolisme PA (Gambar6). Hasil enda ncidahken maka pengaruh PPA nandangi komposisi mikroba mungkin labo semata-mata erkiteken pemakenna, adi lang kelimpahen gen si berhubungan ras metabolisme PPA seharusna ncidahken kelimpahen si lebih tinggi i bas mikrobioma usus tikus si terpapar PPA. Salah sada penjelasenna eme PPA mediasi kelimpahen bakteri terutama arah efek antimikroba labo arah penggunaanna bakteri sebage nutrisi. Penelitian sebelumna enggo ncidahken maka PPA menghambat pertumbuhen Salmonella Typhimurium alu cara si tergantung dosis (Jacobson dkk., 2018). Paparen konsentrasi PPA si lebih tinggi banci memilih bakteri si tahan nandangi sifat antimikroba ras banci saja lenga tentu banci metabolisme ntah pe menghasilkenca. Umpamana, piga-piga spesies Parabacteroides ncidahken kelimpahen si signifikan lebih tinggi i bas sampel PPA, tapi la lit gen si berhubungen ras metabolisme ntah pe produksi PPA si terdeteksi (Tabel Tambahan 2, 4, ras 5). Selanjutna, produksi PPA sebage hasil sampingen fermentasi mbue tersebar ku erbage-bage bakteri (Gonzalez-Garcia dkk., 2017). Keragamen bakteri si lebih tinggi banci jadi alasen kelimpahen gen si lebih tinggi si berhubungen ras metabolisme PPA i bas sampel kontrol (Averina dkk., 2020). Selanjutna, 27 (2,14%) ngenca ibas 1332 gen si iprediksi jadi gen si berhubungan secara eksklusif ras metabolisme PPA. Melala gen si lit hubungenna ras metabolisme PPA si terlibat ka i bas jalur metabolisme si deban. Enda lebih ncidahken maka kelimpahen gen si terlibat ibas metabolisme PPA lebih tinggi ibas sampel kontrol; gen enda banci berfungsi ibas jalur si la menghasilken pemanfaatan ntah pe pembentuken PPA sebage hasil sampingen. I bas hal enda, sada gen ngenca si erhubungen ras generasi PPA ncidahken perbedan si signifikan i bas kelimpahen antara jenis sampel. Berbeda ras gen si berhubungan ras metabolisme PPA, gen penanda guna produksi PPA ipilih erkiteken ia terlibat langsung ibas jalur bakteri guna produksi PPA. I bas tikus si terpapar PPA, kerina spesies idatken secara signifikan meningkatken kelimpahen ras kapasitas guna menghasilken PPA. Enda mendukung prediksi maka PPA-PPA pasti milih produsen PPA janah erkiteken si e prediksi maka kapasitas produksi PPA pasti meningkat. Tapi, kelimpahen gen lenga tentu berkorelasi ras ekspresi gen; alu bage, aminna pe kelimpahen gen si lit hubungenna ras metabolisme PPA lebih tinggi i bas sampel kontrol, tingkat ekspresi banci berbeda (Shi dkk., 2014). Guna mengkonfirmasi hubungen antara prevalensi gen penghasil PPA ras produksi PPA, iperluken penelitian kerna ekspresi gen si terlibat ibas produksi PPA.
Anotasi fungsional metagenom PPA ras kontrol ncidahken piga-piga perbedan. Analisis PCA isi gen ncidahken kelompok-kelompok si terpisah antara PPA ras sampel kontrol (Gambar 5). Pengelompoken i bas sampel ncidahken maka isi gen kontrol lebih beragam, sedangken sampel PPA erkelompok ras-ras. Pengelompoken menurut isi gen sebanding ras pengkelompoken menurut komposisi spesies. Alu bage, perbedan kelimpahen jalur konsisten ras perubahen kelimpahen spesies ras strain tertentu i bas ia. I bas sampel PPA, dua jalur si lit kelimpahenna si signifikan lebih tinggi lit hubungenna ras metabolisme gula amino/nukleotida (ko:K21279) ras jalur metabolisme lipid si erbage-bage (ko:K00647, ko:K03801; Tabel Tambahan 3). Gen si lit hubungenna ras ko:K21279 iteh lit hubungenna ras genus Bacteroides, salah sada genera si jumlah spesiesna signifikan lebih tinggi i bas sampel PPA. Enzim enda banci menghindari respon imun alu mengekspresiken polisakarida kapsul (Wang dkk., 2008). Enda banci jadi alasen peningkatan Bacteroidetes si iperhatiken i bas tikus si terkena PPA. Enda melengkapi peningkatan sintesis asam lemak si iperhatiken ibas mikrobioma PPA. Bakteri memanfaatken jalur FASIIko:K00647 (fabB) guna menghasilken asam lemak, si banci mpengaruhi jalur metabolisme inang (Yao ras Rock, 2015; Johnson dkk., 2020), ras perubahen metabolisme lipid banci berperan i bas perkembangen saraf (Yu20 dkk., 20). Jalur si deban si ncidahken peningkatan kelimpahen i bas sampel PPA eme biosintesis hormon steroid (ko:K12343). Lit bukti si reh teremna maka lit hubungen si terbalik antara kemampuan mikrobiota usus guna mpengaruhi kadar hormon ras guna ipengaruhi hormon, seh maka kadar steroid si meningkat banci saja lit konsekuensi kesehaten hilir (Tetel dkk., 2018).
Pelajaren enda labo tanpa keterbatasen ras pertimbangen. Sada perbedaan si penting eme kami la ngelakoken penilaian fisiologis nandangi rubia-rubia e. Emaka, la banci langsung isimpulken perubahen mikrobioma lit hubungenna ras pinakit kai pe. Pertimbangen si deban eme tikus ibas penelitian enda ibereken pangan si seri ras nandena. Studi si reh banci nentuken adi berubah arah diet si bayak PPA ku diet si la lit PPA, banci nge reh ulina efekna man mikrobioma. Salah sada keterbatasen penelitinta, bagi melala si debanna, eme ukuren sampel si terbatas. Aminna pe banci ibuat kesimpulen si sah, ukuren sampel si lebih mbelin pasti mereken daya statistik si lebih mbelin sanga nganalisis hasilna. Kita pe hati-hati ibas erbahan kesimpulen kerna hubungen antara perubahen mikrobioma usus ras pinakit kai pe (Yap dkk., 2021). Faktor-faktor si erbahanca bingung termasuk umur, jenis kelamin, ras pola makan banci secara signifikan mpengaruhi komposisi mikroorganisme. Faktor-faktor enda banci menjelasken ketidakkonsistenan si iperhatiken ibas literatur kerna hubungen mikrobioma usus ras pinakit si kompleks (Johnson dkk., 2019; Lagod ras Naser, 2023). Umpamana, anggota genus Bacteroidetes enggo teridah banci meningkat ntah pe berkurang i bas rubia-rubia ras manusia si lit ASD (Angelis dkk., 2013; Kushak dkk., 2017). Bagepe penelitian komposisi usus ibas pasien si lit pinakit radang usus enggo ndatken peningkatan ras penurunan ibas taksa si seri (Walters dkk., 2014; Forbes dkk., 2018; Upadhyay dkk., 2023). Guna membatasi dampak bias gender, iusahaken kami memastikan representasi jenis kelamin si seri seh maka perbedan kemungkinan besar igerakken arah pola makan. Salah sada tantangen anotasi fungsional eme penghapusen uruten gen si berlebihen. Metode pengelompoken gen kami membutuhken 95% identitas uruten ras 85% kemiripen gedang, bagepe 90% cakupen alignment guna menghilangkan pengelompoken palsu. Tapi ibas piga-piga kasus, iperdiateken kami COG si lit anotasi si seri (misalna, MUT) (Gbr. 6). Perlu penelitian lebih lanjut guna nentuken apakah ortolog enda berbeda, berhubungan ras genera tertentu, ntah pe apakah enda merupaken keterbatasen pendekatan pengklasteran gen. Keterbatasen anotasi fungsional si deban eme potensi salah klasifikasi; gen bakteri mmdA eme enzim si enggo iteh terlibat ibas sintesis propionat, tapi KEGG la menghubungkenca ras jalur metabolisme propionat. Sebalikna, ortolog scpB ras mmcD lit hubungenna. Melala gen si la lit knockout si itetapken banci erbahanca la banci ngidentifikasi gen si lit hubungenna ras PPA sanga menilai kelimpahen gen. Studi si rehna ndatken manfaat arah analisis metatranskriptom, si banci mereken pemahamen si lebih mbages kerna karakteristik fungsional mikrobiota usus ras menghubungken ekspresi gen ras potensi efek hilir. Bagi penelitian si ngelibatken gangguan perkembangen saraf tertentu ntah pe pinakit radang usus, penilaian fisiologis ras perilaku rubia-rubia iperluken guna menghubungken perubahen komposisi mikrobioma ras gangguan enda. Studi tambahen si mentransplantasiken mikrobioma usus ku tikus si la lit kuman pe banci erguna guna nentuken apakah mikrobioma e me penggerak ntah pe ciri khas pinakit.
Singkatna, icidahken kami maka PPA diet bertindak sebage faktor ibas ngubah komposisi mikrobiota usus. PPA eme pengawet si isetujui FDA si melala lit ibas erbage-bage pangan si, adi terpapar jangka panjang, banci erbahanca terganggu flora usus si normal. Ijumpai kami perubahen i bas kelimpahen piga-piga bakteri, si ncidahken maka PPA banci mpengaruhi komposisi mikrobiota usus. Perubahen mikrobiota banci erbahanca terjadi perubahen tingkat jalur metabolisme tertentu, si banci erbahanca terjadi perubahen fisiologis si relevan ras kesehaten inang. Perlu penelitian lebih lanjut guna metehsa apakah efek PPA diet nandangi komposisi mikroba banci erbahanca disbiosis ntah pe pinakit si deban. Penelitian enda jadi palas guna penelitian si reh kerna uga efek PPA nandangi komposisi usus banci berdampak man kesehaten manusia.
Dataset si ipeseh i bas penelitian enda lit i bas repositori online. Gelar gudang ras nomor akses eme: https://www.
Studi kerna binatang enda isetujui Panitia Perawatan ras Penggunaan Hewan Kelembagaan Universitas Florida Tengah (UCF-IACUC) (Nomor Izin Penggunaan Hewan: PROTO202000002). Penelitin enda sue ras undang-undang, peraturan, ras persyaraten lembaga setempat.
NG: Konseptualisasi, Kurasi data, Analisis formal, Penyelidiken, Metode, Perangkat Lunak, Visualisasi, Penulisen (draft asli), Penulisen (resensi & penyuntingen). LA: Konseptualisasi, Kurasi Data, Metode, Sumber Daya, Penulisen (resensi & penyuntingen). SH: Analisis formal, Perangkat Lunak, Penulisen (resensi & penyuntingen). SA: Penyelidiken, Penulisen (resensi & penyuntingen). Kepala Hakim : Penyelidiken, Penulisen (resensi & penyuntingen). SN : Konseptualisasi, Administrasi Proyek, Sumber Daya, Pengawasan, Penulisen (peninjauan & penyuntingen). TA : Konseptualisasi, Administrasi Proyek, Pengawasan, Penulisen (peninjauan & penyuntingen).
Penulisna ngataken maka la ialokenna dukungen keuangen guna penelitian, penulisen, ras/ntah pe penerbiten artikel enda.
Penulis menyatakan maka penelitian e ilakoken alu la lit hubungen komersial ntah pe keuangen si banci ianggap sebage potensi konflik kepentingen. labo berlaku.
Kerina pendapat si ituriken bas artikel enda eme pendapat penulis saja janah lenga tentu ncidahken pendapat lembaga, penerbit, editor, ntah pe resensina. Produk kai pe si ievaluasi bas artikel enda, ntah pe klaim kai pe si iban produsenna, la ijamin ntah pe idukung penerbit.
Bahan tambahen guna artikel enda banci idatndu i bas internet: https://www.
Abdelli LS, Samsam A, Nasser SA (2019). Asam propionat menginduksi gliosis ras radang saraf alu ngaturken jalur PTEN/AKT ibas gangguan spektrum autis. Laporan ilmiah 9, 8824-8824. 10.1038/s41598-019-45348-z
1982 i bas tahun 1982. Analisis statistik ibas data komposisi. JR Stat Sok Ser B Metode. 44, 139-160. 1982. Tb01195.x
Ahn J, Kwon H, ras Kim YJ (2023) i bas tahun 2023. Rasio Firmikut/Bakteroidet sebage faktor resiko kanker payudara. Jurnal Kedokteran Klinis, 12, 2216. Doi: 10.3390/jcm12062216
I bas tahun 2010, ikataken kalak si deban. Analisis ekspresi diferensial ibas data hitungen uruten. Nat Sebelumna. 1-1, 1-10. 10.1038/nsebelum 2010.4282.1
I bas sada paksa, lit piga-piga kalak si gelarna Angelis, MD, Piccolo, M., Vannini, L., Siragusa, S., Giacomo, AD, Serrazanetti, DI, ras si debanna. (tahun 2013). Mikrobiota feses ras metabolom ibas anak-anak si autis ras gangguan perkembangan pervasif la itentuken si deban. PloS Sada 8, e76993. 10.1371/jurnal.pone.0076993
Averina OV, Kovtun AS, Polyakova SI, Savilova AM, Rebrikov DV, Danilenko VN (2020). Ciri-ciri neurometabolik bakteri mikrobiota usus ibas anak-anak si nguda denga si lit gangguan spektrum autis. Jurnal Mikrobiologi Medis 69, 558-571. 10.1099/jmm.0.001178
I bas tahun 2012, i bas tahun 2012, ikataken kalak si deban. Mikrobioma eme sada organ manusia. Mikrobiologi Klinis ras Infeksi 18, 2-4. 10.1111/j.1469-0691.2012.03916.x
Baur T., Durre P. (2023) i bas tahun 2023. Wawasan si mbaru kerna fisiologi bakteri penghasil asam propionat: Anaerotignum propionikum ras Anaerotignum neopropionikum (si mbarenda igelari Klostridium propionikum ras Klostridium neopropionikum). 11, 685. doi: 10.3390/mikroorganisme11030685
I bas tahun 2004, lit sekalak dilaki si gelarna Bazer FW, Spencer TE, Wu G, Cudd TA, Meininger SJ. Gizi nande ras perkembangen janin. J Gizi. 134, 2169-2172. 10.1093/Jn/134.9.2169
1995. I bas tahun 1995, ibahan Benyamin, ras Hochberg, i bas tahun 1995. Mengontrol tingkat positif palsu: Pendekatan si praktis ras efisien guna tes si erbage-bage. JR Stat Sok Ser B Metode. 57, 289-300. 1995. Tb02031.x
Waktu postingen: 18 Apr-2025